【BI技術者認定試験対策】DNAを爆発的に増やす!「PCR法」を攻略
ベクターや大腸菌を使わずに、試験管内だけで特定のDNA領域を増幅させる「PCR(ポリメラーゼ連鎖反応)」。現代のバイオ研究になくてはならないこの技術の本質を整理しましょう。
1. 問題:PCR法の特徴と仕組み
【 問題 】 PCR法に関する記述として、正しいものをすべて選択してください。(複数選択可)
① 大腸菌やプラスミドベクターを利用せずに、試験管内でDNAを増幅できる。
② 特定のDNA配列を増幅させるために、短い「プライマー」が必要である。
③ DNAを一本鎖にするために、加熱(熱変性)工程が含まれる。
④ 1回のサイクルで、目的のDNA量は3倍に増加する。
⑤ 高温でも壊れない特殊な「耐熱性DNAポリメラーゼ」が使用される。
2. 正解:PCRの原理に関する正解
正解: ①、②、③、⑤
※④は間違い。1サイクルごとにDNAは「2倍」になります。
3. 解説:試験管内のクローニング
PCRは、温度変化を繰り返すだけで、特定のDNA断片を数時間で数百万倍に増やすことができる画期的な手法です。
★ 1. 熱変性(約95℃):二本鎖DNAを加熱して一本鎖に引き剥がします。
★ 2. アニーリング(約50~60℃):増やしたい領域の両端に「プライマー」を結合させます。
★ 3. 伸長反応(約72℃):耐熱性DNAポリメラーゼが、プライマーを起点に新しいDNAを合成します。
[ 従来のクローニングとの違い ]
・かつては「ベクター(運び屋)」にDNAを組み込み、大腸菌に導入して増やしていましたが、PCRはこれらを生体を使わずに(in vitroで)迅速に行えます。
1. 試験のポイント: 「耐熱性酵素(Taqポリメラーゼなど)」を使う理由は、最初の95℃の加熱で酵素が壊れないようにするためです。また、増幅量は $2^n$ (nはサイクル数)で増えるため、爆発的な増幅が可能であるという点を押さえましょう。
2. バイオインフォの視点: PCRを成功させるには、適切な「プライマー設計(Primer Design)」が不可欠です。目的の場所以外に結合してしまわないか、Tm値(結合が解ける温度)が左右で揃っているかなどを計算機で予測するツールは、バイオインフォマティクスの基本ツールの一つです。
4. まとめ
「試験管内での迅速なDNA増幅=PCR法」です。現代ではウイルス検査(PCR検査)から鑑識、ゲノム解析の準備まで幅広く使われています。3つの温度ステップと、なぜ耐熱性が必要なのかをセットで理解しておきましょう!